采用最先进的先导基因编辑技术（Prime Editing，PE），Prime Editing技术非常精确，它能够执行高度指定的删除、插入和碱基交换功能。既不产生DNA双链断裂（DBS），也不需要DNA模板，就可以非常容易实现定向编辑，可以大大提高点突变实验的成功率和效率。

PE技术原理

先导基因编辑（PE)就是一个查找-替换的过程。PE 系统的组成包括先导编辑蛋白（cas 9 nickase、反转录酶）和 pegRNA。Cas9 nickase 是cas9 H840A nickase，可以切割DNA单链；反转录酶（reverse transcripase，RT）是M-MLV；融合后的蛋白可以提高基因编辑效率，被称作为PE1。通过引入RT的突变，提高模板链和引物结合位点的结合能力，进而提高没得活力和稳定性，可以讲PE的编辑效率提高2.3-5.1倍，这被称为PE2。

通过设计一个两端分别携带gRNA 和基因编辑后模板序列的 pegRNA，pegRNA含有特异的引物序列（类似sgRNA）和先导编辑蛋白，特异的引物序列可以定位到特异的位点，先导编辑蛋白是cas9 nickase（切DNA单链）和逆转录酶的融合蛋白。pegRNA的引物序列引导Cas9 nicknase 切割DNA单链，逆转录酶依照未配对pegRNA序列合成新的DNA序列，原位合成新的编辑后序列替代原有序列的过程。

PE技术流程

1. 设计一段带有转录模板（携带想要的基因信息）和必要Prime Binding Site（PBS）的 PE 编辑专用 gRNA——pegRNA。

2. Cas9切口酶在pegRNA上的sgRNA序列指引下，切割DNA单链，pegRNA 3′-端的PBS（引物结合序列）可以与切割断点前的互补序列识别配对

3. 逆转录酶（M-MLV RT）以pegRNA上PBS序列后的人工设计的模板序列为模板进行逆转录，将目标序列直接聚合到切口的DNA链上

4. 编辑后的DNA 双链延伸出一段额外新合成的 DNA Flap，启动细胞自有的3‘flap-5’flap equilibration 机制，将 DNA 原有的片段切除。

5. 不匹配的DNA 双链通过错配修复（mismatch repair，MMR）机制，把非编辑链修复，整个编辑过程就完成了。

服务优势

（1）对PAM序列的限制降低，可以编辑在PAM序列周边30个碱基的区域。

（2）功能更强大，实现包括目标插入，缺失和所有12 种类型点突变。

（3） 更少的副产物，不引入双链断裂和供体DNA 模板。

应用实例

SNU449细胞PPP1R12B基因点突变，突变位置：202558725 A＞G

客户提供

细胞、基因名称 、点突变位置

交付标准

基因点突变的单克隆细胞株（纯合子或者杂合子）×1

项⽬结题报告×1

项目产生的所有原始文件×1