基因敲除-CRISPR/Cas9

CRISPR技术

CRISPR是一种来源于细菌免疫系统的基因编辑技术，能精确识别靶细胞DNA片段中靶点的核苷酸序列，利用核酸内切酶蛋白对DNA靶点序列进行切割，产生双链DNA断裂，断裂将在体内被细胞修复机制修复，其中，非同源末端连接NHEJ这种修复将产生短的核酸插入或删除，其带来的基因移码突变，或导致提前出现终止密码子，从而完成对靶细胞DNA目的基因片段的敲除。在PAM片段上游设计sgRNA后，通过构建基因敲除载体，结合慢病毒系统，可以实现外源基因的整合，利用抗生素或荧光，最终筛选出成功实现基因敲除的细胞。

服务优势

（1）优化升级的CRISPR/Cas9系统，广泛适用于哺乳动物细胞，脱靶率更低。

（2）快速交付，项目周期快至四周。

（3）具备丰富细胞培养经验。

 

服务内容

（1）项目评估

（2）细胞抗生素敏感浓度摸索与单克隆形成验证

（3）sgRNA设计与敲除载体构建

（4）慢病毒包装与转染

（5）阳性多克隆筛选

（6）阳性单克隆筛选

（7）敲除验证

 

应用实例

细胞名称：HCT116

基因名称：NLRP6

实验结果：多克隆测序结果显示sgRNA位点开始出现套峰，单克隆细胞Fast NGS测序验证显示敲除1bp，产生移码突变。

 

 

 

交付标准

基因敲除阳性单克隆细胞株（复苏/冻存）×1

项目结题报告×1

 

服务保证

（1）项目启动后，密切跟进实验进展，每两周进行一次项目进度汇报。

（2）项目结题报告包含sgRNA序列、实验详细记录、测序结果及分析等，满足客户后期论证材料需求。

（3）基因敲除阳性单克隆均经过靶标片段T载体克隆测序验证，保证基因敲除效果。